超微量分光光度計常用于核酸純度分析、蛋白定量以及細菌生長濃度的定量，蛋白質重復性不好是我們遇到的最多的問題，我們從超微量分光光度的測樣原理來分析一下這個問題。

一般來說，在進行超微量分析時，需要用移液槍將1-2 μL的蛋白質樣品加到樣品臺上，利用蛋白質的表面張力，采用樣品拉伸原理，使樣品形成液柱，從未進行檢測，殊不知這個過程就是影響蛋白質測定準確性和重復性不好的關鍵因素，幾乎可以影響蛋白質表面張力的因素都可導致其測試結果的不穩定。現將這些因素總結如下：

                       圖1 元析B-600超微量分光光度計主機                                                  圖2 B-600超微量分光光度計蛋白質測量方法界面

1、溫度導致樣品揮發

首先，液體的溫度與分子間引力有一定的關系。溫度升高，分子間引力將減弱，表面張力也會隨之降低。這也解釋了為何低溫保存的核酸樣品，更易形成液柱。所以，要得到理想的測試效果，首先要確保實驗室環境的溫度和濕度，要預防儀器本身的發熱對樣品的影響。然而，一款擁有封閉式點樣臺的超微量分光光度計可避免這一問題。

2、鹽

無機鹽作為一種非表面活性劑，具有水合作用，趨向于把水分子拖入水中,因此會增大表面張力，反之亦然。因此，脫鹽或低鹽的樣品，表面張力會降低，常見于蛋白純化的流程。例如在進行蛋白質結構分析或質譜分析時，樣品需經過脫鹽處理，這樣的樣品在進行濃度測量時，并不容易形成液柱。

3、表面活性劑

蛋白提取過程中經常使用的表面活性劑（清潔劑），如SDS、Triton X100，會大幅降低樣品的表面張力，這些物質常會殘留在樣本中，難以完全去除。尤其一些非離子型表面活性劑對蛋白質在界面吸附性的影響更加值得考慮。

4、固液接觸表面

當使用移液器將微量樣品加載到點樣臺后，會出現液體與固體的接觸表面，點樣臺表面的親水/疏水性質會影響液體的表面張力。因此，使用拉伸法的主流品牌微量分光光度計，點樣臺表面具有疏水性涂層，會增大液體的張力。

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